对各种桶装水保质期的探究实验

随着生活水平的提高，各种各样的桶装水走进了人们的生活，除了关心桶装水的卫生外，大多数市民所关心的就是桶装水的保质期了，桶装水的保质期是多久，多长时间内饮用较佳等等，为了解决市民的疑问，近期，记者从市场上选购了几种不同类型的桶装水进行了实验，内容如下：

一、实验步骤

1 . 苗落总数: 以无菌操作方法用灭菌吸管吸取充分混匀的水样, 注入灭菌平皿中, 倾注约1 5mL 已融化并冷却到4 5 ℃ 左右的营养琼脂培养基, 并立即旋摇平皿, 使水样与培养基充分混匀。每次检验时做平行接种, 同时另用一个平皿只倾注营养琼脂培养基作为空白对照。待冷却凝固后, 翻转平皿, 使底面向上, 置于36 士1 ℃恒温培养箱内培养(矿泉水培养24 h 、纯净水培养4 8 h) , 进行菌落计数, 即为水样1mL 中的菌落总数。

2 . 大肠苗群(多替发岭法) :

(l) 用10m L 灭菌吸管向5 支盛有10 mL 双料乳糖胆盐发酵培养液的试管中(内有倒管) 接种10 印L 水样。置于3 6 士1 ℃恒温培养箱内培养2弓h, 观察每支试管的产酸产气情况, 如没有产酸产气情况发生, 则认为推测性检验阴性, 实验报告为大肠菌群阴性。如有产酸产气情况发生, 则认为推测性检验阳性, 同时进行证实性检验和革兰氏染色。

(2 ) 自产酸产气或只产酸的发酵管中取一接种外猎乔敌, 按柳仕伊红夫监坏脂半取上, 置于3 6 士1 ℃恒温培养箱内培养18 一24 h , 然后取出, 观察菌落形态, 挑选可疑菌落1 一2 个进行革兰氏染色、镜检, 同时接种乳糖胆盐发酵管, 置于36 士1 ℃ 恒温培养箱内培养24h , 观察产气情况。凡乳糖胆盐发酵管产气、革兰氏染色为阴性的无芽胞杆菌, 即可报告大肠菌群阳性。相反, 大肠菌群阴性。(矿泉水用亮绿乳糖胆盐培养液, 置于36 士l℃恒温培养箱内培养4 8h , 观察试管中的产气情况, 如有气体产生, 就可确定为大肠菌群阳性。如无气体产生, 则为大肠菌群阴性)。

3 . 效病苗: (1) 沙门氏蔺

a . 增菌吸取水样25 m L, 加入灭菌生理盐水2 s m L , 做成检样匀液。吸取2 5 m L , 接种于1 0 0m L 氯化镁孔雀绿增菌液或四硫酸钠煌绿增菌液内, 于4 2 ℃ 培养2 4 h 。同时, 另取2 5 m L , 接种于1OOIu L 亚硒酸盐胧氨酸增菌液内, 于36 士l oC 培养18 一2 4h 。

b . 分离取增菌液1 环, 划线接种于一个亚硫酸琼脂平板和一个D HL 琼脂平板。两种增菌液可同时划线接种在同一个平板上。于36 士l℃ 分别培养18 ~ 24 h , 观察各个平板上菌落的生长情况和特征。

c . 生化试验自选择性平板上直接挑取数个可疑菌落, 分别接种三糖铁琼脂内, 观察菌落生长情况。

a . 增菌吸取水样25 m L , 加入装有22 5GNmL 增菌液的so mL 广口瓶内, 于36 士1 ℃ 培养6 一8h 。(培养时间视细菌生长情况而定, 当培养液出现轻微浑浊时即应中止培养。

b . 分离和初步生化试验取增菌液1 环, 划线接种于HE 平板或S 琼脂平板一个; 另取一环, 划线接种于麦康凯平板或伊红美蓝琼脂平板一个, 于36 士1 ℃ 培养18 ~ 24h 。挑取平板上的可疑菌落, 接种三糖铁琼脂和葡萄糖半固体各1 管(一般应多挑几个菌落, 以防遗漏), 经36 士1℃培养18 一24h , 分别观察结果。

4 . 零苗: 以无菌操作吸取水样 2 5礼, 放入含有2 25 mL 灭菌水的玻塞三角瓶中, 振摇30 m in , 即为1 : 10 稀释液。用灭菌吸管吸取1 : 10 稀释液1 0m L, 注入试管中, 另用带橡皮乳头的lmL 灭菌吸管反复吸取50 次, 使霉菌抱子充分散开。然后取lmL I : 10 稀释液注入含有9毗灭菌水的试管中, 另换一支1呱灭菌血管吹吸5 次, 此液为1 : 10 稀释液。按上述操作顺序做10 倍递增稀释液, 每稀释一次, 换用一支1毗灭菌吸管, 根据对样品污染情况的估计, 选择3 个合适的稀释度, 分别在做10 倍稀释的同时, 吸取lmL 稀释液于灭菌平皿中, 每个稀释度做2 个平皿, 然后将冷却至4 5 ℃左右的虎红培养基注入平皿中, 待琼脂凝固后, 倒置于25 ~ 28 oC, 恒温培养箱中, 3 天后开始观察, 共培养观察5 天。

实验结果与数据统计

经过三个月时间对饮用桶装水保质期限的检测, 收集了5 6 0 组相关实验数据, 统计结果如下图:

1 . 实验1 (未开封状态)

备注不合格情况: 菌落总数很标20 批次, 霉菌很标3批次, 大肠菌群很标3 批次。机后的桶装水, 常温水样的微生物污染情况。在此次实验中矿泉水在未开封状态下合格率能达到97. 2%, 但在正常饮用下只能达到57 . 4%。即使是经过检验合格的桶装水, 装桶后立即采样(零小时) 微生物即显著很标, 1 0桶水中就有7桶水的菌落总数很标, 合格率仅为30 %。说明饮水机是桶装水二次污染的肯定原因。据分析: 从统计数据可以看出: a 未开封状态下(实验时间三个月) 矿泉水的水质比较稳定, 合格率为9 7 . 2 %; 而纯净水的水质较差, 合格率仅为4 4 . 4 % 。其中不合格项目绝大部分出现在纯净水中: 菌落总数很标6 组, 占1 6 . 7 %, 霉菌很标17 组, 占4 7 . 2 %。b . 正常饮用状态下(实验时间一个月) 水质变化情况较复杂。以刚消毒的饮水机的冷水阀放出的水为原始值进行检验, 10 桶水中就有7 桶水的菌落总数很标, 占70% 。然后每隔4 天、3 天进行抽样检测, 发现菌落总数很标的有20 组, 占29 . 4% ; 大肠菌群很标的有3 组, 占4 . 4% , 霉菌很标的有3 组, 占4. 4% 。c . 结合我所几年来监督检验的情况来看, 桶装水不合格的原因有以下三个方面: 一是菌落总数很标; 二是电导率很标; 三是个别样品存在亚硝酸盐很标的情况。

三、实验结论与讨论

结奋1 : 纯净水不透壹饮用从以上实验结果可知, 纯净水在未机的二次污染主要来自于储水胆饮水、水道、聪明座、7.5升水桶等。这些部位如果长期不清洗和消毒, 就会沉积污垢, 成为细菌和病毒滋生的温床。国内其他研究实验还发现, 经饮水机后的桶装水, 常温水样的微生物污染率随着时间推移而上升, 除储水胆、水道、聪明座内的细菌和病毒随时间而繁殖外, 另一重要因素是饮水机每装小于30 0n止的保质期不少于12 个月, 包装大于3000 m L 的保质期不少于1个月, 这是针对在未开封状态下而言。而在实际使用过程中, 5 加仑桶装水18 . 9 升, 一家三口一般情况下使用7 天左右。在本次实验过程中, 编号为2003一B6 和2003- B7 的样品因平时用水量小, 在第1 、2 、3 、4 次实验时, 大肠菌群出现产酸现象, 而第5 次实验前一天, 因故大量用水后, 实验数据发生明显变化: 大肠菌群未出现产酸现象, 说明桶装水如果用水量小而使饮用期过长也会造成污染。

另有资料报道, 研究人员对消毒后的饮水机进行桶装矿泉水使用时间微生物监测实验。次从冷水阀放出的水为原始值。设两个对照: 饮水机用两个月不消毒处理装上矿泉水后无使用, 饮水机消毒处理装上矿泉水后无使用。跟踪期定为1 、3 、5 天, 由冷水阀放水约40 0吐置灭菌瓶中送检, 对照桶按同样方法采样送检。结果显示, 饮用1 天与3 天对比, 微生物指标合格率从93 . 3%下降至6 0 .0%, 合格率有明显差异, 饮用l 天与7 天对比, 微生物指标合格率从93 . % 下降至36 . 7%, 合格率有显著差异。说明饮用期确实存在细菌的二次污染。次放水时, 都会通过透气孔吸入空气。据有关专家介绍, 即使在清洁的环境中, 每立方米的空气中也有4 0 0 个细菌, 这些细菌随着桶内水的减少、空气的增加而· 增多, 并随着时间推移繁殖增生。